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原代細胞培養基的凍存與復蘇技術工藝

更新時間:2021-07-22

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   原代細胞培養基用于人臍帶間充質干細胞分離培養方法的研究。是培養原代細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養原代細胞生長和繁殖的生存環境。細胞培養基是人工模擬動物細胞的體內生長環境,維持體外細胞存活和增殖的營養物質基礎,其主要功能是為細胞提供適宜的pH和滲透壓,以及細胞本身不能合成的各種營養物質。
  原代細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
  原代細胞培養基凍存
  1、選用生長情況好,數量較多的原代細胞,凍存前一天換液一次。
  2、貼壁細胞需用0.25%胰酶常規消化將細胞消化下來,將細胞懸液收集至離心管中。
  3、1000rpm離心5分鐘,棄上清液。
  4、沉淀加含DMSO的培養液,計數,調整至(1-10)×106/ml。
  5、將懸液分至凍存管中,每管1ml。
  6、密封凍存管,封口一定要嚴,否則復蘇時易出現爆裂。
  7、用記號筆標明細胞種類,凍存日期。
  8、按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(—80℃過夜)→液氮。
  原代細胞培養基復蘇
  1、取出細胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍。
  2、吸出細胞懸液,并加10倍以上培養液。
  3、1000r/分鐘離心5分鐘,去除上清。
  4、用培養液適當稀釋后接種培養瓶,放入37℃ CO2培養箱靜置培養。
  鏡檢細胞貼壁能力。次日更換一次培養液,繼續培養。
 
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