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轉染試劑的使用方法

更新時間:2022-11-24

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   轉染試劑是一種新結構類型的DNA轉染試劑。該轉染試劑為陽離子聚合物和脂質體的雜合體,具有轉染效率高、重復性好、毒性低和穩定性的特點,目前該轉染試劑為我公司產品。轉染試劑用于哺乳動物細胞的轉染,如腫瘤細胞系(常見的細胞有HEK293,CHO,COS-1,COS-7,Hela,NIH3T3等)和原代培養的細胞以及昆蟲細胞sf9,sf21等。轉染試劑,1.0ml,可用于24孔板轉染333次或者6孔板166次轉染操作。
  轉染試劑的使用方法:
  1、接種細胞:
  對于貼壁細胞,轉染前18-24 h進行鋪板(不含抗生素),使其在轉染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞,轉染當天,配制EZ Trans-DNA復合物之前進行鋪板,每500 ?L生長培養基中加入4~8×105cells。
  2、準備EZ Trans-DNA復合物:
  a、對于每孔細胞,將1 μg質粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基(或者OPTI-MEMⅠ培養基),混勻。
  b、對于每孔細胞,將3 μL EZ Trans轉染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基(或者OPTI-MEMⅠ培養基),輕輕混勻。
  注:無血清的高糖DMEM培養基是稀釋液,不能使用含血清的培養基進行DNA和EZ Trans轉染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉染復合物的形成過程不能含有血清。
  c、將稀釋好的EZ Trans轉染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質粒DNA中,輕輕混勻。
  d、室溫放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA復合物。
  3、轉染細胞:
  a、將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養皿中。輕輕晃動培養皿或輕微振蕩,讓EZ Trans-DNA復合物分散均勻。
  b、在37℃,5% CO2培養箱培養6-18 h,去除含EZ Trans-DNA復合物的培養液,更換新的培養液,繼續培養至對轉入基因表達分析。
  以上就是轉染試劑的相關知識點,希望以上的內容能夠對大家有所幫助,感謝您的觀看和支持,后期會整理更多資訊給大家,敬請關注我們的網站更新。
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