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流式細胞儀的調試和校準方法

更新時間:2023-02-22

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   流式細胞儀是一種用于分析細胞的技術,包括細胞計數、表型、細胞周期評估和生存能力。流式細胞儀中激光器產生的光被樣品中的細胞散射,由檢測器測量,然后轉化為可分析和測量的信號。
  調試和校準
  流式細胞儀在使用前,甚至在使用過程中都要精心進行調試,以保證工作的可靠性和最佳性。調試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區的光路等。
  激光強度:除調整反射鏡的角度以調整到所需波長的激光出光外,還要結合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為最大。
  液流速度:可通過操作臺數字顯示監督,調節 氣體壓力大小以獲得穩定的液流速度。
  測量區光路調節 :這是調試工作的關鍵。需要保證在測量區的液流、激光束、90散射測量光電系統垂直正交,而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。
  流式細胞術中所測得的量是相對值,因此需要在使用前或使用中對系統進行校準或標定,這樣才能通過相對測量獲得絕對的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調整和定量標度。標準樣品應該穩定,有形成份形狀應是大小比較一致球形,樣品分散性能良好,且經濟、容易獲得。常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品,雞血紅細胞做為生物學標準樣品。微球用樹脂材料制作,或標有熒光素,或不標記熒光素。所用的雞血紅細胞標準樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4),經PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合,室溫下振蕩醛化24h,最后經PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經熒光染色,所測光信號為雞血紅蛋白的自發熒光。
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