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NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 cDNA合成

簡要描述:NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 cDNA合成
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  • 產品型號:
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-09-05
  • 訪  問  量:1244
詳細介紹
品牌其他品牌貨號E6300S
供貨周期現貨主要用途cDNA合成
應用領域醫療衛生,生物產業,綜合

NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 cDNA合成

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NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 cDNA合成

ProtoScript® cDNA 第一鏈合成試劑盒含兩種經優化的混合液:M-MuLV 酶混合液和 M-MuLV 反應混合液。M-MuLV 酶混合液含 M-MuLV 反轉錄酶和小鼠 RNase 抑制劑,M-MuLV 反應混合液含 dNTP 和經優化的緩沖液。該試劑盒還包含兩種優化的反轉錄引物和無核酸酶水。錨定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 迫使引物與 polyA 尾的起始端退火。經優化的隨機引物混合液能隨機并持續性地與整個 RNA 模板配對,包括 mRNA 和無 polyA 尾的 RNA。合成的第一鏈 cDNA 產物長度可超過 10 kb


成功合成 cDNA 的要素:

RNA 模板
高純度的完整 RNA 對于靈敏的 RT-PCR 檢測至關重要。RNA 的 A260/A280 比值應至少 1.7 或更高。

總 RNA 或 mRNA 均可用于反轉錄反應。總 RNA 通常足以進行大多數 RT-PCR 分析。不過,如果需要,可以使用 PolyA Spin mRNA 分離試劑盒(NEB #S1560)或 mRNA 磁性分離試劑盒(NEB #S1550)獲得 mRNA。

檢測所需的 RNA 量取決于目標轉錄本的豐度。通常推薦使用 1 ng 至 1 μg 的總 RNA 或 0.1-100 ng 的 mRNA。

cDNA 第一鏈合成反應
RNA 和引物在 70℃ 條件下變性 5 分鐘,可以去除阻礙較長 cDNA 合成的二級結構。不過,可以在某些情況下省略此步驟(結果未發表)。

推薦在 42℃ 條件下溫育一小時,以獲得最高產量和最大長度。不過,許多靶標用較短的溫育時間即可進行檢測。例如,對于 2 kb cDNA 合成,溫育 5 分鐘就足夠了。

選擇反轉錄引物
Oligo d(T) 引物是大多數實驗的首·選,因為它確保所有 cDNA 拷貝在 mRNA 的 3′ 端終止并產生最長的連續 cDNA。錨定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 迫使引物與 polyA 尾的起始端退火,從而防止在 polyA 尾的內部位點開始退火(1)。不過,如果需要,也可以選擇另外兩種引物。

隨機引物混合液是經優化的六聚體和 d(T)23VN 引物混合液。該混合液能隨機地與整個 RNA 模板配對,包括 mRNA 和無 polyA 尾的 RNA(例如核糖體 RNA)。隨機引物混合液產生的 cDNA 平均長度較短,可用于檢測多個短 RT-PCR 產物。隨機引物混合液在各種 RNA 模板中均具有良好的性能。

基因特異引物用于 cDNA 合成反應時,cDNA 產物只能用于擴增該轉錄本。RNA 起始量較低(低于 10 ng)且只需要一種特定的 cDNA 時,使用這種方法可以獲得良好的結果。

推薦的引物濃度:
引物:終濃度
OLIGO d(T)23VN:5 μM
隨機引物混合液:6 μM
特異引物:0.1–1 μM


NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 cDNA合成

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產品應用:
ProtoScript® First Strand cDNA Synthesis Kit 適用于以下應用領域:

  • 定量RT-PCR (qRT-PCR): 利用高保真cDNA合成結果進行定量基因表達分析。

  • 基因克隆: 在克隆實驗中用作RT-PCR的cDNA模板,確保高保真度。

  • 基因組學研究: 用于復雜基因組和轉錄組分析,生成高質量的cDNA片段。

  • 病毒學研究: 適用于病毒RNA逆轉錄,生成高質量cDNA供后續分析。


華雅思創生物提供New England BioLabs (NEB)全系列產品:包括限制性內切酶,PCR、qPCR和擴增試劑,DNA修飾酶,NGS和目標濃縮的樣品制備,核酸提純,RNA試劑,DNA組裝、克隆和誘變試劑盒,基因組編輯試劑,細胞分析,表觀遺傳學,蛋白質表達與純化技術,感受態細胞,蛋白質工具,糖生物學,DNA質粒,緩沖液,菌株。


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